小鼠巨噬細胞系RAW-264.7(生物安全等級2)在ibidi µ-Slides VI 0.4 和8孔腔室載玻片的培養方案。這是一個特殊的細胞系的例子,用于顯示粘附時間,細胞密度和細胞形態的示范。本應用可根據您的具體實驗要求進行調整。
1.細胞培養與材料制備
在將細胞接種到玻片中之前,按照常規的方法培養細胞?! ?/p>
µ-Slide VI 0.4 :通道玻片和培養基,在37℃和5%CO2培養箱中培養過夜。這對于避免隨著時間的推移出現氣泡至關重要。為此,在50 ml器中填充適量的培養基,并輕輕地將瓶蓋擰緊。在 µ-Slide 8孔載玻片開放孔井中,氣泡可排出到大氣中?! ?/p>
拆開µ-Slide的包裝,把它放在µ-Slide支架上,并在準備細胞懸浮液時同時將蓋子放在 Luer 適配器/孔上。
2.播種細胞
分離細胞:
吸出培養瓶中的培養基,并用PBS洗滌細胞一次。每75cm2 燒瓶中加入3-5 ml的Accutase,并將燒瓶放入培養箱中以加快分離速度。如果是RAW-264.7細胞系,則大約需要8分鐘。使用Accutase分離的細胞存活率更高?! ?/p>
2.1. 將細胞接種到µ-Slide VI 0.4中
在µ-Slide VI 0.4建議的細胞濃度:最終細胞數 0.3 x 10 5 cells/cm2,制備濃度6 x 10 5cells/ml。通過將移液器底部直接放在通道的入口上,將30 µl細胞懸浮液填充到每個通道中。將蓋子蓋在玻片上,在37°C和5%CO2下孵育半小時以固定細胞。
細胞貼壁后,分別用60 µl無細胞培養基填充儲液池。 避免將移液器吸頭直接指向通道的入口。將玻片放回培養箱中?! ?/p>
圖1:接種后一小時,在ibiTreat µ-Slide VI 0.4(貨號80606)中的RAW-264.7
圖2: 在ibiTreat µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7,孵育24小時后
圖3:在ibiTreat µ-Slide VI0.4中的RAW-264.7,培養四天后
2.2 將細胞播種在µ-Slide 8 well 中
在µ-Slide 8 well建議的細胞濃度:最終細胞數 0.3 x 10 5 cells/cm2 ,制備濃度 1.1 x 10 5 cells/ml。將300 µl 的細胞懸浮液注入各孔中。將蓋子蓋在玻片上,在37°C和5% CO2中孵育。不需要進一步添加培養基。
圖4:在ibiTreat µ-Slide 8 well(貨號:80826)中的RAW-264.7,播種后1小時
圖5: 在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,孵育24小時后
圖6:在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,經過四天的培養
為獲得最佳的分布的勻的細胞,我們建議使用像µ-Slide VI 0.4 這樣的通道載玻片。在8孔腔室載玻片中,細胞密度可能會在孔的整個表面上因點而異,具體取決于細胞播種過程中的處理。
3. 免疫熒光染色
像往常一樣為您的細胞固定和染色?! ?/p>
注意:在 µ-Slides 中染色時注意液體的處理
µ-Slide VI 0.4 :更換液體,先吸出兩個儲液池而不排空通道。 如果您使用的是真空設備,請注意不要將吸頭直接放在通道的入口上。 用100 µl新溶液沖洗通道3次。 從一側添加新的溶液,通過通道流入另一個儲液池,然后從另一側吸出,直到兩個儲液池都排空。注意通道永遠不要干涸!
µ-Slide 8孔載玻片:在 µ-Slide 8孔中,無需特殊處理措施。像在任何其他培養皿或孔板中一樣的交換液體。