應用Ibidi傷口愈合插件進行共培養“傷口愈合"實驗,對周細胞與肺微血管內皮細胞做共培養遷移試驗。
實驗步驟:
1)鋪細胞(圖二)
將ibidi傷口愈合培養皿底部的保護膠帶撕除。在ibidi細胞插件的每孔中分別加入1.5 ×104的PMVECs和Pericyte的細胞懸液。注意不要大力晃動培養皿。以防止細胞不均勻。在37℃培養箱中孵育
圖二,ibidi傷口愈合插件中加入細胞
2)形成“劃痕"
采用無血清培養基饑餓細胞16小時。如圖四所示,小心的用鑷子夾住插件的一個角,將插件移除。
圖三,移除插件
移除插件后,要用顯微鏡檢查是否形成合格的“劃痕"?! ?/p>
小心的清洗細胞,之后加入2ml培養基進行培養(圖四)
采集并分析圖像:
在顯微鏡下選取能同時看到“劃痕"和兩邊細胞的視野進行成像,“劃痕"的方向最好是水平或者垂直?! ?/p>
采集0h和6h的圖像,觀測細胞的遷移率和細胞遷移方向,用中性粒周蛋白定位微管生長中心(MTOC)并用鬼筆環肽標記F-actin
由圖可見,相對于左側的對照,右邊的PAH來源的Pericytes遷移距離較短,并且從熒光標記圖上可見,紅色箭頭表示遷移的方向,PAH組無特定方向,不受PMVEC的影響。柱狀圖為統計結果。